IMEDEEN Prime Renewal, in vitro vizsgálat

IMEDEEN Prime Renewal - Dr. Nico Smit et al., 2003 - In Vitro

 

A tanulmány célja

A tanulmány célja annak az anti oxidáns kombinációnak a megtalálása és hatásának dokumentációja volt a célja, mely a legjobban megvédi a bőrsejteket az UV sugarak károsító hatásától.

Vizsgálati módszerek

Biopsziával fibroblasztokat (jellegzetesen szétterülő nagy alapsejt) és melanocitákat (lombos fához hasonlító festéksejt) nyertek ki felnőtt európai bőrből. Standard körülmények között tenyésztették őket. A sejteket alfa tocopheryl acetate-ből (E-vit), L-ascorbic-savból(C-vit), fehér tea kivonatból (wt), szőlőmag kivonatból (gs) és paradicsom kivonatból (te) álló úgynevezett ViTea (TM)-val kezelték. A sejteket UVA sugárzásnak vetették alá Sellas Sunlight lámpát használva 360kJ/m2 mennyiségben. Egy csoport kezeletlen sejt volt a kontrol.

Fluorogenic (DHR123) próbával (egy anyag azon tulajdonsága, mely indukálja, vagy fokozza a fluoreszkálást egy másik molekuláris egység hozzáadásakor) és a fluoreszkálás számszerű mérésével 535nm-nél lemez-olvasó által, illetve FACS (fluoreszkálás által aktivált sejtkiválasztó) analízist használva elemezték a sejtközi reaktív oxigén fajok (ROS) szintjét. A lipid peroxidációt zöld FL-1 fluoreszkálásként FACS-szal mérték C11-Bodipy581/591-et használva. A fibroblasztokban bekövetkezett  UV által kiváltott DNS lánctöréseket a lúgos üstökös próbával mutatták ki.

Eredmények és értekezés

A ROS csökkentése a ViTea által

A ROS szintet zöld FL-1 szín intenzitás alapján mérték, miután DHR123 fluoreszkálás próbával inkubálták. Minél intenzívebb a zöld szín, annál több ROS mutatkozik meg a sejtben.                           Bal oldal: DHR123 fluoreszcens tenyésztett fibroblasztban (Fluorescens mikroszkóp képe).                                           Jobb oldal: DHR123 melanocitákban látszik(Konfokális mikroszkóp képe)

A ViTea következetesen csökkentette a ROS szintet több melanocita és fibroblaszt tenyészetben.

A bal oldali képen látszik, hogy az E- és C-vitaminok hatására a ROS szint 19%-kal csökkent a melanocitákban. A ViTea a kontrolhoz képest 65%-kal csökkentette a ROS szintet.

A jobb oldali grafikon egyértelműen mutatja, hogy a Vi Tea-val való előérlelés 74%-kal csökkentette a ROS szintet a fibroblasztokban a kontrolhoz képest.

A lipid peroxidáció csökkenése a ViTea hatására

Lipid peroxidáció folyamán a C11-Bodipy581/591 pirosról zöldre változik. Az UVA megemelte a zöld FL-1fluoreszcenst a kontrol sejtekben, míg a ViTea részben megakadályozta a zöld fluoreszcens gyarapodását, vagyis megakadályozta a lipid peroxidációt.

 ViTea-val történő előérleéls hatására 55%-kal csökkent az UVA által kiváltott lipid peroxidáció a fibroblasztokban.

A DNS károsodásának csökkentése a ViTea által

Üstökös próbával mérték a DNS-ek megrongálódását: minél hosszabb az üstökös csóvája, annál inkább károsodott a sejtmag/DNS. Az első képen UV-károsodás előtti, a második képen pedig az UV-károsodás utáni osztatlan sejtmag látszik.

Az itt látható digramm az átlagos csóvahosszt mutatja. A ViTea-val történő előérlelés  hatására 24%-kal csökkent a fibroblasztokban okozott DNS károsodás.

Konklúzió

A ViTea csökkentette a szabad gyökök mennyiségét és minimalizálta az UV besugárzásnak a szerkezeti lipidekre és a DNS-re gyakorolt károsító hatását.